白癜风医院去哪家最好 http://m.39.net/pf/a_4457217.html知母AnemarrhenaeRhizoma为百合科植物知母AnemarrhenaasphodeloidesBge.的干燥根茎，在《神农本草经》中位列中品，具有清热泻火、滋阴润燥的功效，用于外感热病、内热消渴等症。现代研究表明知母中主要化学成分为皂苷类和*酮类等[1-2]，具有解热、抗炎、改善学习记忆[3-5]、降血糖和神经保护作用等药理活性[6-10]。
《中国药典》年版对知母药材和饮片的加工分别进行了描述，即知母药材为“除去须根和泥沙，晒干”，知母饮片（生品）为“知母除去杂质，洗净，润透，切厚片，干燥，去毛屑”[10]。此种加工工艺使得知母从药用植物到饮片需要经过干燥（晒干）、水软化处理、再干燥的复杂过程。知母新鲜药材含水量较高，依靠自然条件干燥（晒干）需要较长时间，且在干燥过程中可能会造成药材霉变；知母药材在水软化处理过程中可能会造成有效成分流失，上述因素均可影响药材质量。与传统加工工艺相比，饮片产地加工与炮制一体化工艺可大大缩短加工时间，节约生产成本，同时也可减少药材在加工过程中有效成分的流失，避免知母药材在贮存和运输过程中可能会发生的霉变、腐烂等[11]。因此，本实验研究了知母产地加工与饮片炮制一体化加工工艺。
《中国药典》年版记载知母皂苷B-II、芒果苷为评价知母质量的指标性成分。本实验测定并比较了知母传统工艺饮片和一体化工艺饮片中知母皂苷B-II和芒果苷的含量，采用酵母致热大鼠模型和链脲佐菌素（STZ）诱导糖尿病大鼠模型，比较了2种工艺饮片的解热和降糖的药效学作用，进一步探讨并比较2种工艺是否存在差异，以期为知母产地加工一体化提供科学依据和有益参考。
1仪器与材料
AgilentTechnologies高效液相色谱仪，AgilentTechnologies二元泵，AgilentTechnologiesDAD、ELSD检测器，OpenLABCDS色谱工作站，美国Agilent公司；KQ-KDE型超声清洗仪，昆山市超声仪公司；FA型万分之一电子天平，上海精科仪器有限公司；SC69-02C型水分快速测定仪，江苏维科特仪器仪表有限公司；YM-2型滚筒式脱毛机、XY-型洗药机、HX-*型蒸汽炕、Xp-型药材切片机均购自康华制药机械有限公司；CT-CIII型热风循环烘箱，江阴市龙昌机械制造有限公司。
知母鲜药采于亳州市十九里镇，经安徽中医药大学刘守金教授鉴定为百合科植物知母AnemarrhenaasphodeloidesBge.的根茎。对照品知母皂苷B-II（批号-，质量分数98.6%）、芒果苷（批号-02，质量分数99.3%）均购于南京元宝山色谱试剂有限公司；乙腈，色谱纯，Fisher公司；超纯水，实验室自制；冰醋酸，分析纯，天津四友精细化学品有限公司。链脲佐菌素（批号K），Sigma公司；酵母、阿司匹林、盐酸二甲双胍片、大鼠胰岛素试剂盒、糖化血清蛋白试剂盒等均购于合肥臻沃生物医药科技有限公司。
雄性SD大鼠，体质量～g，动物许可证号SCXK（皖）-，购于安徽医科大学实验动物中心。
2方法与结果
2.1一体化工艺优选
2.1.1知母药材前处理取新鲜知母，除去须根及地上部分，抢水洗去泥沙杂质，晾干，即得。
2.1.2指标性成分含量测定方法知母皂苷B-II及芒果苷含量均采用《中国药典》年版知母“含量测定”项下有关内容进行。即采用以乙腈-水（25∶75）为流动相，采用高效液相色谱法蒸发光散射检测器（HPLC-ELSD）检测知母皂苷B-II的含量，以乙腈-0.2%冰醋酸水溶液（15∶85）为流动相，在检测波长为nm（HPLC-UV）条件下测定芒果苷的含量。对照品溶液及供试品溶液液相色谱图见图1、2。
2.1.3对照品溶液制备取知母皂苷B-II对照品适量，精密称定，用30%丙酮溶解，定容，配制质量浓度为0.mg/mL知母皂苷B-II对照品溶液。另取芒果苷对照品适量，精密称定，用甲醇超声溶解，最后定容，配制成质量浓度为0.94mg/mL的芒果苷对照品溶液。
2.1.4线性关系的考察取上述知母皂苷B-II对照品溶液，将其分别稀释2、4、8、10、20倍，取10μL，注入液相色谱仪，以知母皂苷B-II进样质量的对数值为横坐标（X），峰面积的对数值为纵坐标（Y），进行线性回归分析，得线性方程Y＝1.X＋4.，r＝0.，表明知母皂苷B-Ⅱ在0.～4.96μg与峰面积线性关系良好。取上述芒果苷对照品溶液，将其稀释2、4、5、8、10、20倍，分别注入液相色谱仪，进样体积为20μL，以芒果苷进样质量为横坐标（X），以峰面积为纵坐标（Y），进行线性回归，得线性方程Y＝.84X＋，r＝0.，表明芒果苷在0.94～5.66μg与峰面积线性关系良好。
2.1.5供试品溶液的制备精密称取知母粉末0.15g，加入25mL30%丙酮，称定质量，超声提取30min，补足减失的质量，滤过，取续滤液过0.22μm微孔滤膜，供测定知母皂苷B-II用。精密称取知母粉末0.1g，加入50%乙醇25mL，称定质量，超声提取30min，用提取溶剂补足减失的质量，滤过，取续滤液，过0.22μm微孔滤膜，即得，供测定芒果苷含量用。
2.1.6因素水平选择、一体化工艺优选及结果分析课题组前期通过单因素实验，确定知母药材切制前的最佳烘制温度为50℃，药材最佳含水量为40%，切片厚度为4mm，切制后饮片烘干温度为50℃。为客观反映加工工艺中各环节对知母饮片（生品）质量的影响，采用以外观性状（平整率）、知母皂苷B-II含量、芒果苷含量为指标，综合评分法进行评价。其中外观性状（平整率）、知母皂苷B-II含量、芒果苷含量权重系数分别为0.2、0.4、0.4，同时运用SPSS20.0对实验结果进行方差分析，综合评分计算公式：综合评分＝(芒果苷含量/芒果苷含量最大值)×0.4＋(知母皂苷B-II含量/知母皂苷B-II含量最大值)×0.4＋(平整率/平整率最大值)×0.2。考察加工过程中药材烘制温度（A）、药材含水量（B）、切片厚度（C）、烘干温度（D）4个因素，采用正交试验优选最佳加工工艺。实验设计与结果见表1，方差分析见表2。
本实验为4因素3水平正交试验，采用L9(34)正交实验设计，由于没有空列，在进行方差分析时以最小变异因素C（切片厚度）为误差变异来源进行方差分析[12]。方差分析结果显示药材烘制温度（A）、药材含水量（B）对知母饮片一体化加工工艺产生显著性影响（P＜0.05），饮片干燥温度对实验结果无显著性影响。
因此由正交试验分析得出的一体化加工最佳鲜药烘制温度为60℃，药材最佳含水量为40%。因切片厚度（因素C）变异最小，饮片干燥温度（因素D）对实验结果无显著性影响，结合实验室前期单因素实验结果，确定最佳切片厚度为4mm，最佳饮片干燥温度为50℃。然而知母鲜药在60℃条件下烘制会使药材断面颜色加深，即出现“溏心”现象，故将最佳工艺调整为将知母鲜药在50℃条件下烘至药材含水量40%，切4mm纵片，于50℃条件下烘干。
2.2中试生产
在实验室研究基础上，结合饮片生产企业（安徽济人药业有限公司）拥有的低温烘干设备的实际情况，以鲜知母（去须根后）45～50℃低温烘制，使药材含水量达到45%～50%，考察其鲜药烘制温度与烘制时间、切片厚度及切片后饮片的烘干温度，同时考察知母去须根、去毛的时间，以建立知母产地加工与炮制一体化的产业化生产工艺。经反复试验，确定生产工艺。
2.2.1烘制温度的考察取新鲜知母3份，每份50kg，分别在40、50、60℃烘至药材含水量为45%～50%，固定切片厚度为4mm，考察烘制温度对知母鲜药的干燥时间、含水量、药材断面颜色的影响。实验结果见表3。
由实验结果可知，烘制温度为60℃时，药材断面出现颜色加深现象（呈棕褐色），同时在切制过程中出现碎屑，与鲜药烘制温度过高，药材含水量偏低有关。当烘制温度为40℃或50℃时，药材外观性状和内在质量均符合《中国药典》年版标准，然而当烘干温度为40℃时，烘到适宜含水量的时间较长，能耗较大，不符合企业生产要求，故选定鲜药烘制温度为50℃，烘制时间11h。
2.2.2去须根及去毛方式的优化根据饮片生产企业生产经验结合实验结果，选定知母鲜药烘制11h后，于滚筒中“撞去毛”，选定脱毛时间为30min。
2.2.3知母饮片（生品）不同干燥温度的考察取新鲜知母3份，每份50kg，于50℃条件下烘制11h（药材含水量约45%），确定切片厚度为4mm，考察不同干燥温度对知母饮片的影响。结果见表4。由实验结果可知，当烘干温度为40℃时，药材干燥时间较长，干燥温度为60℃时，药材出现翘片现象，可能为干燥温度较高，药材表面水分散失过快所致。故选定干燥温度为50℃，干燥时间10h。
2.2.4知母产地加工与炮制一体化产业化加工工艺确定取知母鲜药材，抢水洗净泥土杂质，除去地上部分，于50℃条件烘制约11h（药材含水量45%～50%），于滚筒中撞去毛，脱毛时间30min，切4mm厚片，于50℃条件下烘干。
2.2.5一体化最佳工艺验证及与传统工艺的比较取大小均匀的新鲜知母50kg，分别按照所优选的最佳工艺和《中国药典》年版一部中规定方法加工知母饮片。对2种工艺制得知母中知母皂苷B-II和芒果苷进行含量测定，验证一体化工艺的合理性。结果见表5。由2个成分含量可知，2种工艺之间无显著性差异（P＞0.05）；实验结果表明该工艺切实可行，可操作性强。
2.3一体化工艺饮片和传统工艺饮片对酵母致热大鼠模型体温调节的影响[13]
随机取雄性SD大鼠（体质量～g）若干，每只背部sc15%的干酵母混悬液（10mL/kg），5h以后基础体温上升1℃以上的视为造模成功。将发热大鼠随机分为6组，每组8只，分别为模型组，阿司匹林阳性对照组（mg/kg），一体化工艺饮片低、中、高剂量（0.7、1.4、2.8g/kg）组，传统工艺饮片组（2.8g/kg）。另随机取大鼠8只，作为对照组（生理盐水）。各组大鼠ig给药。分别于致热前，致热后，给药后0.5、1、2、3、4h测量大鼠肛温，通过致热后与给药后各时间点的体温进行组间t检验，比较各组之间的差异，结果见表6。实验结果表明，各药物均有不同程度的解热效果，在给药后2h后大鼠体温均有降低，与同组致热后及模型组比较具有显著性差异（P＜0.05），且一体化工艺饮片低、中、高剂量组解热效果呈递增趋势。一体化饮片中剂量与传统工艺饮片表现出相同的解热作用，表明知母一体化工艺饮片的解热效果与传统加工品相同。
体温上升率＝(致热后体温－致热前体温)/致热后体温
2.4一体化工艺饮片和传统工艺饮片对糖尿病大鼠血糖的影响[14]
取雄性SD大鼠（体质量～g），适应性饲养5d后，造模前禁食12h，随机选取大鼠若干，一次性ipSTZ（65mg/kg），72h后进行眼框取血，测空腹血糖值（FBG），选取造模后FBG大于16.7mmol/L的大鼠作为实验动物模型。将造模成功的大鼠随机分为6组，每组8只，分别为模型组，盐酸二甲双胍阳性对照组（mg/kg），知母一体化工艺饮片高、中、低剂量（2.8、1.4、0.7g/kg）组，知母传统工艺饮片组（2.8g/kg）。取8只正常大鼠，每只ip等量的柠檬酸钠缓冲液，作为对照组。将以上各组大鼠分别按照对应给药剂量连续给药15d，对照组与模型组给予相应体积的生理盐水。每5天测量1次FBG。与同组给药前及模型组比较，结果见表7。给药15d后将大鼠麻醉，腹主动脉取血，血液置于1.5mL离心管中，室温静置30min，r/min离心（4℃）10min取血清，分别测定各实验组大鼠血清中糖化血清蛋白及胰岛素含量。实验结果见表8。
由表7可知，在给药15d后，一体化饮片高、中、低剂量均能降低糖尿病大鼠的血糖值，与模型组相比有显著性差异，说明知母药材具有一定的降糖作用，与文献研究结果一致[15-16]。由表8可知，知母传统工艺饮片组和一体化工艺饮片高、中剂量均能降低血清中糖化血清蛋白和血清胰岛素的含量，一体化饮片低剂量未表现出显著的降糖作用。上述实验结果表明一体化工艺饮片和传统工艺饮片降糖作用无显著性差异，说明一体化工艺饮片与传统工艺饮片在药效上具有等效性。
3讨论
本实验以正交设计法优选出知母产地加工与炮制一体化工艺，继而于饮片生产企业进行中试生产，最终确定知母产地加工与炮制一体化加工工艺，实验结果表明该工艺可用于产业化生产，本实验结果具有一定的实际指导意义。一体化工艺饮片与传统加工工艺饮片的定量分析结果显示，一体化工艺饮片知母皂苷B-II与芒果苷的含量与传统加工工艺含量无显著性差异。
酵母致热大鼠模型体温调节实验结果表明，一体化工艺饮片水提物高、中、低剂量均能降低发热大鼠模型体温，与模型组相比均有显著性差异（P＜0.05），且一体化工艺饮片的解热作用有高于传统工艺饮片的趋势，可能与动物降低体内相关炎症因子有关[17]，其解热机制尚需进一部研究。文献研究表
明知母提取物及其有效成分具有降血糖作用[18]，而且芒果苷可促进糖尿病小鼠肌、肝糖原的合成和胰岛素的分泌[19]从而发挥降糖作用，实验结果显示一体化工艺所得饮片降糖作用与传统工艺所得饮片降糖作用相比无显著性差异，这与含量测定结果具有一致性。
综上所述，一体化工艺饮片与传统工艺饮片相比在指标性化学成分上无显著性差异，说明一体化工艺饮片与传统工艺饮片在化学组成上具有等量性；药效方面，2种工艺均有一定的解热和降糖作用，一体化工艺饮片与传统工艺饮片解热、降糖作用无显著性差异，说明一体化工艺饮片与传统工艺饮片在药效上具有等效性。同时，一体化工艺参数可适用于产业化生产，与传统工艺相比，降低了劳动时间，节约能耗，本实验结果为知母产地加工与炮制一体化提供一定的科学依据和理论参考。
参考文献（略）
来源：*琪，贾鹏晖，吴德玲，金传山，许凤清，朱月健，李保明.知母产地加工与饮片炮制一体化工艺研究[J].中草药,,49(20):-.
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